【通蔚生物】：活性蛋白提取試劑盒的應(yīng)用

活性蛋白提取試劑盒用于從動(dòng)物組織中提取有活性的總蛋白，該試劑由一種溫和的非離子型去污試劑、緩沖試劑和氯化鈉等組成。采用勻漿或超聲破碎時(shí)，該試劑高效提取的蛋白質(zhì)可以盡可能地保持活性，可以用于1D和2D電泳、免疫共沉淀、Pull down、EMSA、報(bào)告基因分析（Luciferase、β-galactosidase、Chloramphenicol Acetyltransferase等）、蛋白質(zhì)激酶分析（PKA、PKC、Tyrosine Kinase等）、酶免分析（Western Blot、ELISA、RIA）、蛋白質(zhì)純化等實(shí)驗(yàn)，含有的去污試劑可通過透析去除。

活性蛋白提取試劑盒由抽提試劑、蛋白酶抑制劑混合物、DTT和PMSF組成。

特點(diǎn)：
整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程只需要20 min左右；
可以處理20×100 mg的動(dòng)物組織樣品；
提取的蛋白質(zhì)可以透析去除離子和去污試劑，或?qū)⒕彌_液替換為所需要的合適緩沖液；
提取的活性蛋白質(zhì)保持非變性狀態(tài)，可以直接用于1D和2D電泳、Pull Down、EMSA、免疫共沉淀、蛋白純化、酶活分析等實(shí)驗(yàn)；
可以維持報(bào)告基因酶（Luciferase、β-galactosidase、Chloramphenicol Acetyltransferase等）、蛋白質(zhì)激酶（PKA、PKC、Tyrosine Kinase等）的活性。

操作步驟
1.將100 mg組織剪切成小塊，盡量去除脂肪組織和結(jié)締組織等非目的組織，加入適量的預(yù)冷的1X PBS于4°C，700 g（3000rpm）離心3 min，棄掉上清，重復(fù)洗滌兩次。

2.向以上洗滌后的組織中加入1 mL預(yù)冷的抽提試劑（使用前向每1 mL抽提試劑中加入1μl DTT，10μl PMSF，1μl蛋白酶抑制劑），置玻璃勻漿器冰上均質(zhì)30~50次至組織完全成勻質(zhì)狀液體無明顯組織小塊。

3.最大速度渦旋振蕩10 sec，冰上放置20 min，期間取出振蕩3~5次，再于4°C，12830g（12000 rpm）離
心10 min以沉淀組織或細(xì)胞碎片，轉(zhuǎn)移上清為組織活性總蛋白部分，分裝并保存于-80°C，用于下游實(shí)驗(yàn)。