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【通蔚生物】關于流式細胞儀你了解多少?

2023-03-07

流式細胞術是一種對溶液中單個細胞或顆粒進行快速、多參數分析的技術。流式細胞儀利用激光作為光源,照射在細胞上,產生散射光和熒光信號,由檢測器如光電二極管或光電倍增管讀取。之后,這些信號被轉換成電子信號,由計算機進行分析,并寫入標準格式(.fcs)數據文件。另外,細胞群可以根據其熒光或散射光的特性進行分析或分選。
用于流式細胞術的儀器在過去的幾十年里不斷“進化”著,以滿足越來越多的科研與臨床應用需求。
傳統流式細胞儀:
傳統的流式細胞儀由液流、光學和電子(檢測分析)三個系統組成。
液流系統:
液流系統主要由鞘液(通常是一種緩沖鹽水溶液)構成。在一定壓力下,鞘液將細胞或顆粒聚焦在一條直線,并將其輸送到激光攔截點。
光學系統:
光學系統由激發光 (激光器)和收集光 (光電倍增管或PMTs和光電二極管)組成,產生用于分析樣品的散射光和熒光信號。一系列的雙色向濾光片可引導熒光到特定的探測器,以便每一個單獨的熒光色素可以被檢測和測量。更具體地說,雙色向濾光片只允許波長較短或較長的光通過,并以一定角度反射不能通過的光。例如,450雙色向長通濾光片(DLP)讓波長大于450 nm的光通過濾光片,并以一定角度反射較短波長的光,發送到另一個探測器。帶通濾光片只允許一定波長范圍內的熒光通過。例如,450/50帶通濾光片只允許波長為450 +/- 25 nm的熒光通過。
電子系統:
電子系統將探測器發出的信號轉換成可以被計算機讀取的數字信號。
常見的多激光系統通常有20個參數(FSC, SSC和18個熒光探測器)。目前,一些新的儀器正在引入5個或更多的激光器,并設置30-50個參數,但這并不常見。傳統流式細胞儀使用的最常見的激光是488 nm(藍色)、405nm(紫色)、532nm(綠色)、552nm(綠色)、561 nm(綠黃色)、640 nm(紅色)和355 nm(紫外線),還有一些不常見的激光可用于特定用途。此外,還有一些儀器已經用電子崩光電二極管(APD)取代光電倍增管(PMT)用于熒光檢測,目的是提高檢測的靈敏度。
以上是上海通蔚生物為大家簡單介紹幾種流式細胞儀操作望對您的科研事業提供綿薄之力!
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