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品質保證 · 通蔚試劑

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產品中心

  • 新生隱球菌PCR試劑盒

    規格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW37412
    • 應用 : 僅供科研使用
    • 貨期 : 現貨
    • 規格 :50次
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產品及特點:
新生隱球菌(Cryptococcus neoformans)是深部感染真菌中隱球菌屬的主要菌種之一,種類較多,廣泛分布于自然界,例如受動物污染的土壤,檢出率較高。由于腫瘤及化療藥物的使用、艾滋病的流行、移植術后免疫抑制藥物的使用等原因,新生隱球菌的發病率越來越高,在國外已成為艾滋病患者常見的并發癥之一,也是導致患者死亡的重要原因,在我國新生隱球菌的發病率也呈逐年增加的趨勢,因此快速檢測新生隱球菌具有重要意義。
本產品是根據PCR 原理開發檢測新生隱球菌的試劑盒,它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供DNA模板。
2. 引物經過精心優化,專一性強,只擴增新生隱球菌,與其他病原沒有交叉反應。
3. 提供陽性對照,便于區分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料,PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次,但只能用于科研。
規格及成分:

編號

成分

規格

試劑一

PCR MagicMix 3.0

1 mL(紅蓋)

試劑二

超純水

1 mL(亮黃色)

試劑三

新生隱球菌 PCR 引物混合液

100 μL(白蓋)

試劑四

新生隱球菌 PCR 陽性對照(1×10E8 /μL)

50 μL(黃蓋)

試劑五

使用手冊

1 份

運輸及保存:
低溫運輸,-20℃保存,保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置,不要污染其他試劑。
自備試劑:
樣品DNA。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備:
1. 用自選方法純化N+2個樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N個樣品,則需要做N+2個提取,包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水(取決于試劑盒要求的樣品起始量)中加 10μL 新生隱球菌PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得,樣品制備陰性對照是直接用水。提取結束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設置 PCR 反應(40μL 體系):
3. 對N+2個樣品,在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照,故需要設置N+4個反應。在N+4個PCR管中分別加入下列成分:

成份

N+2 個樣品管

PCR 陰性對照

PCR陽性對照

PCR Magic Mix 3.0

20μL

20μL

20μL

新生隱球菌PCR 引物混合液

2μL

2μL

2μL

N+2個樣品DNA模板

18μL

--

--

PCR 陰性對照(水)

--

18μL

--

PCR 陽性對照(新生隱球菌PCR陽性對照1000倍稀釋液)

--

--

18μL

4. 按下表設置 PCR 反應:

過程

溫度

時間

預變性

95℃

5 min

PCR 反應35個循環

95℃

30 sec

55℃

30 sec

72℃

40 sec

延伸

72℃

7 min

三、電泳檢測:
5. 取 10-20 μL PCR 產物。電泳檢測 PCR 產物。本產品提供的 PCR Mix 在 擴增結束后可以直接上樣,不需要另外再加 loading buffer。PCR 產物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現,陰性對照必須無任何擴增,否則實 驗無效。對沒有擴增產物的樣品,可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。
四、特別提示:
本公司的所有產品,僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
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