埃希氏菌屬通用PCR試劑盒

產品及特點：

埃希氏菌屬（Escherichia spp.）包括大腸埃希氏菌,即埃希氏菌屬通用(Escherichia coli)、傷口埃希氏菌(Escherichia vulneris)、弗格森埃希氏菌(Escherichia fergusonii)、赫氏埃希氏菌(Escherichia hermanii)和塞內加爾埃希氏菌(E .senegalensis)等菌種, 是動物腸道正常菌群之一，但在某些條件下, 如機體防御機能降低或濫用抗生素等, 此菌可進入機體的其他部位引起感染。以往對腸道菌群的研究主要依賴對腸黏膜和糞便細菌的分離培養鑒定, 可以分離的細菌種類有限，因此快速靈敏檢測埃希氏菌具有重要的意義，本試劑盒就是為此目的根據 PCR 原理開發，

1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。

2. 引物經過精心優化，專一性強，只擴增埃希氏菌屬通用，與其他病原沒有交叉反應。

3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。

規格及成分：

編號	成分	規格
試劑一	PCR MagicMix 3.0	1mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1mL（亮黃色）
試劑三	埃希氏菌屬通用PCR引物混合液	100μL（白蓋）
試劑四	埃希氏菌屬通用PCR陽性對照1×10E8 /μL	50μL（黃蓋）
試劑五	使用手冊	1 份

運輸及保存：

低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其他試劑。

自備試劑：

樣品 DNA。

使用方法：

一、樣品 DNA 的制備：

1. 用自選方法純化N+2個樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。

2. 如果有N個樣品，則需要做N+2個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL埃希氏菌屬通用PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、設置 PCR 反應(40μL 體系)：

3. 對N+2個樣品，在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照，故需要設置N+4個反應。在N+4個PCR管中分別加入下列成分：

成份	N+2個樣品管	PCR陰性對照	PCR陽性對照
PCR Magic Mix 3.0	各20μL	20μL	20μL
埃希氏菌屬通用PCR引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2個樣品DNA模板	各18μL	--	--
PCR陰性對照(水)	--	18μL	--
PCR陽性對照埃希氏菌屬通用PCR陽性對照1000倍稀釋液	--	--	18μL

4. 按下表設置 PCR 反應：

過程	溫度	時間
預變性	95℃	5 min
PCR 反應35個循環	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、電泳檢測：

5. 取 10-20 μL PCR 產物。電泳檢測 PCR 產物。本產品提供的 PCR Mix 在擴增結束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產物陽性對照必須有 551bp 大小的條帶出現，陰性對照必須無任何擴增，否則實驗無效。對沒有擴增產物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。

四、特別提示：

本公司的所有產品，僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

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埃希氏菌屬通用PCR試劑盒說明書
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