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產(chǎn)品及特點(diǎn)：
支原體（mycoplasma）是 1898 年 Nocard 等發(fā)現(xiàn)的一種類似細(xì)菌但不具有胞壁的原核微生物，能在無生命的人工培養(yǎng)基上生長繁殖，直徑 50-300nm，能通過細(xì)菌濾器。又稱霉形體，為目前發(fā)現(xiàn)的最小的最簡單的原核生物，支原體細(xì)胞中唯一可見的細(xì)胞器是核糖體(支原體是原核細(xì)胞，原核細(xì)胞的細(xì)胞器只有核糖體)。基因組多為雙鏈 DNA，散布于整個細(xì)胞內(nèi)沒有形成的核區(qū)或擬核。與泌尿生殖道感染有關(guān)的主要是分解尿素支原體和人型支原體兩種，約有20-30%的非淋菌性尿道炎的病人，是由以上兩種支原體引起的，是非淋菌性尿道炎及宮頸炎的第二大致病菌。因此對支原體進(jìn)行快速靈敏的診斷具有重要的意義。本產(chǎn)品就是為此目的根據(jù) PCR 原理開發(fā)的產(chǎn)品，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。
2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增人支原體，與其他病原沒有交叉反應(yīng)。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。
規(guī)格及成分：
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編號 |
成分 |
規(guī)格 |
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試劑一 |
PCR MagicMix 3.0 |
1 mL（紅蓋） |
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試劑二 |
超純水 |
1 mL（亮黃色） |
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試劑三 |
人支原體 PCR 引物混合液 |
100 μL（白蓋） |
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試劑四 |
人支原體 PCR 陽性對照（1×10E8 /μL） |
50 μL（黃蓋） |
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試劑五 |
使用手冊 |
1 份 |
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。
自備試劑：
樣品 RNA。
使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 用自選方法純化N+2個樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N個樣品，則需要做N+2個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 人支原體 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系)：
3. 對N+2個樣品，在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照，故需要設(shè)置N+4個反應(yīng)。在N+4個PCR管中分別加入下列成分：
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成份 |
N+2 個樣品管 |
PCR 陰性對照 |
PCR陽性對照 |
|
PCR Magic Mix 3.0 |
各 20μL |
20μL |
20μL |
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人支原體PCR 引物混合液 |
各2μL |
2μL |
2μL |
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N+2個樣品DNA模板 |
各18μL |
-- |
-- |
|
PCR 陰性對照（水） |
-- |
18μL |
-- |
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PCR 陽性對照（人支原體PCR陽性對照1000倍稀釋液） |
-- |
-- |
18μL |
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過程 |
溫度 |
時間 |
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預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
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PCR 反應(yīng)35個循環(huán) |
95℃ |
30 sec |
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55℃ |
30 sec |
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72℃ |
40 sec |
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延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。
四、特別提示：
本公司的所有產(chǎn)品，僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
